实验鲫鱼饲料中蛋白水平超越鱼体最适需要量时，就会有一部分蛋白质用于供给能量而非用于生长，从而降低了蛋白质和氨基酸的使用效率，导致测定的必需氨基酸的需求量偏高，故在测定必需氨基酸需求量时，饲料蛋白水平应比实际蛋白需要量偏低，以利于其他氨基酸的使用程度到达最大。
饲料能量水平也会影响鱼类的必需氨基酸需求量。必需氨基酸需求量和饲料能量水平呈正相关。也有研讨以为，在比较不同鱼类Arg需要量时，饲料能量水平不容忽视。因而，一些学者在研讨必需氨基酸需求量时也开端考虑饲料中能量水平对研讨结果的影响。
必需氨基酸之间的相互作用
从Arg的分解代谢途径能够看出，当饲料中有鸟氨酸和瓜氨酸存在时，某些鱼类能够少数组成Arg，从而使鱼类对Arg的需求量降低。此外，很多鱼类中还存在Lys-Arg拮抗现象。当饲料中Lys水平高于最适需求量85%时，虹鳟幼鱼对Arg的需求量升高。此外，Arg代替物的差异也会影响Arg的需求量，当以谷氨酸（Glu）为Arg的等氮代替物时，斑驳叉尾鮰对Arg的需求量为3.3%~3.8%（%粗蛋白），而当以甘氨酸（Gly）为其等氮代替物时，得到的Arg需求量为4.2%~5.0%（%粗蛋白），或许的原因是斑驳叉尾鮰能够在体内使用Glu少数组成Arg。
此外，必需氨基酸之间的相互转化，如Met可部分转化为Cys，Phe可部分转化为Tyr，Trp可转化为烟酸等也是导致鱼类的必需氨基酸需求量产生差异的主要原因。